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02_2D培训_二维电泳设备简易操作说明

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Ettan IPGphor 3 简要操作指南-标准型胶条槽
注意: ? 使用过程中,确保室内温度在 20 摄氏度!保持设备及周围环境干燥! ? 该设备为高压设备,不当操作可能导致电击危险! ? 该设备为双向电泳系统中的一个设备,请阅读双向电泳原理和方法手册了 解其他信息! 1. 调节仪器水*。 2. 参照水化液用量表(如下),样品与适量水化液混合,小心加入胶条槽。 3. 胶条室温*衡 30min,从酸性端(尖端)一侧剥去 IPG 胶条的保护膜。胶面朝 下,先将 IPG 胶条尖端(阳性端)放入胶条槽中,慢慢放下胶条,并前后拖动, 避免生成气泡。 4. 从两端向中间加入 1-2ml 覆盖油防止水分蒸发。 5. 盖好胶条槽盖。确保电极和胶条的两端有良好的接触。 6. 水化:水化可以在 20 摄氏度进行(被动水化)或 Ettan IPGphor 3 仪器内提 供低电压(主动水化)进行。水化时间至少 10 小时。 7. 将胶条槽放置在 Ettan IPGphor 3 的电极*台上。酸端在正极,碱端在负极。 放置位置参考电极盘左侧刻度。*台上一次最多可*行放同长度的胶条槽 12 根。 8. 将两条透明的压板分别放在正极端和负极端以施加合适的压力确保胶条与电极 完全接触;盖好安全盖,轻轻下压,使其锁紧。 9. 盖*踩呛螅舻缭矗卦谝瞧鞅趁孀蟛唷?螅低尘约旌蠼 待机状态。 10. 程序设置和选择:可通过安装在 PC 上的控制软件或在 Ettan IPGphor 3 面板 *醇柚贸绦颍 Ettan IPGphor 3 上可以储存 10 个多达 9 步设置好的程 序;这些设置好的程序可以直接调用,也可以在编辑后运行。可以设置的参数 包括水化温度和时间,等电聚焦时的最大电流,电压,温度及电压改变模式 等。请参见双向电泳原理和方法手册了解不同长度和 pH 范围胶条的推荐运行 条件。 11. 用左、右箭头将光移至 Prot# 1 处,用上、下箭头选择被调用的方法号。使用 右向箭头移动光标至 File,并用上、下箭头编辑方法名。 12. 如果需要,设定水化时间(对于主动水化设为 0h)、温度和等电聚焦的温度 20 度、最大电流 50uA/strip。 13. 按 EDIT 键进入 IEF 参数设置:用左、右箭头将光移至需编辑参数处,用上、 下箭头改变参数。最多可以设定九步程序的电压、持续时间及电压改变模式 (step/gradient)。 14. 再按一次 EDIT 键保存所有修改。按 START 开始,输入胶条数,再次按下 START 开始运行程序。在运行过程中,按 STOP 键暂停程序;再按 START 键则继续运 行;连续按二次 STOP 键则结束程序,并显示总的运行时间,伏小时数等参 数。

15. 运行过程中若需打开安全盖,首先暂停运行,再按下安全盖打开设备,只有重 新合*踩呛蟪绦虿呕峒绦诵小 16. 待程序运行结束,首先关闭电源;取出胶条进行下一步实验。清洁聚焦*台后 盖好安全盖。

Ettan IPGphor 3 简要操作指南-多功能聚焦盘
注意: ? 使用过程中,确保室内温度在 20 摄氏度!保持设备及周围环境干燥! ? 该设备为高压设备,不当操作可能导致电击危险! ? 该设备为双向电泳系统中的一个设备,请阅读双向电泳原理和方法手册了 解其他信息! 1. 水化: a. 参照水化液用量表,将水化液与适量样品(若水化上样)混合;调节溶胀盘 (IPGbox)水*,小心将液体加入泡涨盘。 b. 胶条室温*衡 30min,从酸性端(尖端)一侧剥去 IPG 胶条的保护膜。胶面 朝下,先将 IPG 胶条尖端(阳性端)放入聚焦盘中,慢慢放下胶条,并前后 拖动,避免生成气泡。 c. 从两端向中间加入约 3ml 覆盖油防止水分蒸发 (最新 IPGbox 可不加覆盖 油)。盖上泡涨盘上盖,室温水化至少 10 小时。 2. 调节 IPGphor3 水*。将 Manifold 多功能聚焦盘放置在 IPGphor 3 的电极*台 上,T 形口对齐。 3. 将已水化的 IPG 胶条转移到任一聚焦盘胶条槽内。胶面朝上,酸端放+极,碱 端放-极,并确保胶条位于胶条槽的中央(聚焦盘胶条槽内四对凸起可用于指 导胶条放置在居中位置)。 4. 在每根 IPG 胶条表面覆盖 6~9ml 覆盖油,胶条两侧的空槽内也要加相同体积覆盖 油。 5. 取两片 IEF 电极片,用去离子水浸湿后放在滤纸上,去除多余的水。 6. 分别将两个 IEF 电极片放在 IPG 胶条胶的两端,将电极压在两个电极片的外 缘,并关闭锁扣。 7. 如采用样品杯上样(步骤 7,8,9),可将样品杯(若杯上样)放在两个电极 间除聚焦盘内侧凸起外任何位置(切忌放在凸起上),对于碱性分离范围的 IPG 胶条,尽量将样品杯靠*阳极放置。

8. 9.

在样品杯中加入少量不含样品的水化液或者覆盖油检查是否漏液。上样前吸走 水化液。 上样前将样品离心,去除沉淀不溶物,每个样品杯可加样 20-100μl,浓度不超 过 10mg/ml,加覆盖油覆盖样品。

10. 盖*踩牵舻缭矗卦谝瞧鞅趁孀蟛唷?螅低尘约旌蠼 待机状态。 11. 程序设置和选择:可通过安装在 PC 上的控制软件或在 Ettan IPGphor 3 面板上 按键设置程序,在 Ettan IPGphor 3 上可以储存 10 个多达 9 步设置好的程序; 这些设置好的程序可以直接调用,也可以在编辑后运行。可以设置的参数包括 水化温度和时间,等电聚焦时的最大电流,电压,温度及电压改变模式等。请 参见双向电泳原理和方法手册了解不同长度和 pH 范围胶条的推荐运行条件。 12. 用左、右箭头将光移至 Prot# 1 处,用上、下箭头选择被调用的方法号。使用 右向箭头移动光标至 File,并用上、下箭头编辑方法名。 13. 如果需要,设定水化时间(对于 Manifold 设为 0h)、温度和等电聚焦的温度 20 度、最大电流 50uA/strip。 14. 按 EDIT 键进入 IEF 参数设置:用左、右箭头将光移至需编辑参数处,用上、 下箭头改变参数。最多可以设定九步程序的电压、持续时间及电压改变模式 (step/gradient)。 15. 再按一次 EDIT 键保存所有修改。按 START 开始,输入胶条数,再次按下 START 开始运行程序。在运行过程中,按 STOP 键暂停程序;再按 START 键 则继续运行;连续按二次 STOP 键则结束程序,并显示总的运行时间,伏小时 数等参数。 16. 运行过程中若需打开安全盖,首先暂停运行,再按下安全盖打开设备,只有重 新合*踩呛蟪绦虿呕峒绦诵小 17. 待程序运行结束,首先关闭电源;取出胶条进行下一步实验。清洁聚焦*台后 盖好安全盖。

垂直电泳槽 ETTAN DALTsix 操作指南
1. 电泳槽下槽中装满电泳缓冲液(约4L)。打开循环水浴温控系统,设置温度为 12°C。电泳槽连接电源开始温控。 2. 量筒中倒入电泳缓冲液,将*衡好的IPG胶条浸入电泳缓冲液中几秒钟润滑,注 意不要粘上泡沫。 3.将IPG胶条小心的放置于SDS胶面上,并轻压使IPG胶条与SDS胶面充分结合,上 面覆盖1-2ml热的琼脂糖溶液(低于70°C),若两个胶*面间有气泡可用薄尺轻轻 压胶条驱赶气泡。使琼脂糖在5分钟内凝固。其余的IPG胶条重复上述操作。 4. 将三明治凝胶以及空白板共6块插入胶架,放入电泳槽中。用电泳缓冲液湿润上 槽后,安装上槽。倒入上槽电泳缓冲液(约1.2L)。由侧面补加电泳缓冲液至 下槽,使得上下槽液面一直。 5. 连接电泳仪(EPS601),设定参数。若恒功率(constant power)电泳:设电流 400mA,电压600V。采用垂直的SDS胶电泳,电泳过程中不必去除IPG胶条。

6. 当溴酚蓝染料迁移到胶的底部边缘即可结束电泳,关闭电源。 7. 跑好的胶转移到染色盒里固定,准备染色。

附:使用DALTsix灌胶膜具凝胶用量计算: 凝胶溶液总量 = 75ml × 胶数 + 80ml

注意:保持电源周围干燥,注意防电。




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